目前日期文章:201201 (2)

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目前發展成熟而被應用在許多研究的次世代定序技術中,被定序的library 大多為DNA而非RNA(定序原理請參照本部落格先前文章),在現有的mRNA-seq技術中,需先將RNA反轉錄為DNA,製備出DNA型態的library後,始能執行定序反應。針對mRNA-seq,近日Lira Mamanova團隊以Illumina定序平台為基礎,發展出可直接以RNA library做為定序材料的新技術,名為FRT-seq(Flowcell Reverse Transcription sequencing),此技術將RNA library注入flowcell內,並且直接在flowcell內執行反轉錄及bridge PCRFRT-seq能完整保留RNA正負股的資訊(strand-specific mRNA sequencing),除此之外,其製備library過程中不需經由PCR的放大,所以可以減少PCR所產生的錯誤(請參照本部落格PCR free文章)

FRT-seq library的製備過程中,首先將mRNA純化出來並且打斷,再將RNA3'5'端分別接上兩段特殊設計且不同序列的adapter,經由qPCRlibrary分子大小的檢查後,便能以Illumina cBotRNA library注入flowcell內,經由反轉錄及bridge PCR反應後,即可執行定序反應,流程如下圖所示。

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不管是測DNA、RNA或是protein濃度單位大多以ng/μl為準,很少會以nM為單位。因此對於這方面的單位換算來說許多人都很陌生,也因為陌生可能導致遺忘如何換算或因陌生而不敢接觸,所以在這我們將舉個簡單的例子來說明ng/μl與nM的單位換算方式。
例子1.

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