NGS是目前最新且高通量的定序方法，所謂的NGS是指傳統定序法的改良版，而傳統定序法可以分成兩種來說明之。
第一種：Chemical Sequencing
第二種：Sanger Sequencing
我們就拿Sanger Sequencing來解釋何謂傳統定序法？
Sanger於1977年研究出鏈終止定序法(chain termintin)，這是當時簡單又方便的定序法，同時也是奠定了現今NGS的基礎。此方法為：
(1)利用DNA當模板，分別將DNA分成4組同時加入DNA polymerase以及dNTP合成。
(2)分加入雙去氧核苷酸(ddATP、ddGTP、ddTTP、ddNTP)反應，雙去氧核苷酸
將會移除烴基，而於合成過程中隨機終止聚合反應，造成不同大小的DNA片
段。
(3)透過電泳分析讀出待測物DNA序列。
由於有以上的定序基礎，在80年代後出現了自動定序儀器。
自動定序儀器在目前市面上可見到有Illumina的Solexa、ABI的SOLiD與
Roche的454，這些皆可稱為次世代定序儀(Next Generation Sequencing , NGS)，
然而這三種代定序儀的原理都有些許不同，但不管是哪種都是採用鏈終止定序法(chain termintin)來進行DNA定序，不需要經由細菌進行質體複製，以減少錯誤發生率。
次世代定序儀(Next Generation Sequencing , NGS)是種最新的定序技術及概念，
藉由大量而快速來進行短序列片段(Short Reads)的定序。其原理(Illumina System)：
(A)將待測DNA打斷成300-500bp片段，並於兩端接上adapter。
(B) 將以接上adapter的片段，loding到表面帶有互補adapter序列的晶片(flow cell)上。
*資料來源:Mardis ER. Next-generation DNA sequencing methods. Annu. Rev. Genomics Hum. Genet. 2008;9:387-402.
(C)透過橋式聚合酶鏈鎖反應進行增幅
*資料來源:Mardis ER. Next-generation DNA sequencing methods. Annu. Rev. Genomics Hum. Genet. 2008;9:387-402.
(D)loding不同鹼基且標記特定可移除螢光分子的dNTP與反應試劑，重覆進行螢光標記移除與偵測，以達到快速且大量的定序結果。
*資料來源:Mardis ER. Next-generation DNA sequencing methods. Annu. Rev. Genomics Hum. Genet. 2008;9:387-402.
喔喔!讚喔! 這篇我居然能讀下去(能稍為理解的意思)耶! 不過好像有幾句話是重複到嗎?
謝謝你的建議，我們會馬上更正
很清楚的介紹,很感謝:))
SANGER法應該是移除"羥基"吧
不好意思，在選字時沒注意到部首，謝謝您的指正
請問我有一隻細菌，以Illumina做全基因定序，基因公司送回的data顯示有10幾個scaffold。請問這代表無法將這些sequence組合成一個完整的circular DNA序列嗎？
是的，若當初序列組裝時的參數沒有太大的錯誤的話，單以這樣的資料是無法組成完整的 circular DNA 序列的。如果再加做 optical mapping 的話，相信有很高的機會能組完整的 circular DNA 序列。
很詳細的介紹! 謝謝. 不過我有個小疑問, 之前自動定序的錯誤應該多半來自Taq 錯誤的neucleotide的incorporation, 而非"細菌進行質體複製"的錯誤, 後者有proof-reading功能應該錯誤率比Taq低很多很多!?
是的，的確來自於Taq錯誤的neucleotide會多於"細菌進行質體複製"的錯誤
很棒的介紹 感謝!!
感謝您的支持；有勁將會繼續努力的在科學研究上面，繼續為大家服務。
太強了吧
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謝謝你有條理的介紹！
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