有勁的基因資訊

作者：林佑軒/有勁生物科技

　　利用非侵入性產前篩檢(NIPT; Non-Invasive Prenatal Testing)進行胎兒染色體套數異常篩檢，很多人都知道具備高準確性與非侵入性這兩種優勢。然而，跟其他篩檢一樣，NIPT也有無法提供檢出結果的可能(no-call rate)，但這點卻鮮少被大家提出來討論。

　　依據NIPT施作的檢測平台與方法不同，約有0.12%至8.09%不等的案件其檢測無效，而無法提供結果報告¹ ；這些案件即便為產婦再次抽血與篩檢，仍然有2 到4成的孕婦無法拿到檢測結果²。當NIPT無法取得檢出結果時，除了重新抽血可能增加孕婦困擾與焦慮外，有研究指出這些無結果的NIPT案件，胎兒或孕婦後來發現染色體存在異常狀況的機率也比能順利取得NIPT結果的正常案件要來得高³。由此可見，NIPT一旦無法取得結果而必須重檢，便有可能會延誤醫師診斷與醫療處置的時間。因此，瞭解為何NIPT會無法提供檢測結果，並提前避免這些狀況發生或知道該如何因應也就相形重要。

　　那麼，哪些情況會讓NIPT無法檢出結果？可能原因很多，大致可區分為下述三類⁴：

1.血液樣品的品質不佳

NIPT檢測所使用的採血管有保護血漿游離DNA的功能，在常溫下能維持血液品質兩週。但血液在運送到檢測實驗室的過程中，若環境溫度曾超過攝氏35-37度、或者樣品曾被置於低溫環境中致結凍，便有可能發生溶血或血漿游離DNA裂解的情況。此外，血液樣品在運送過程中若未妥善包裝，劇烈的搖晃也可能造成血球破裂。品質不佳的血液樣品便可能讓NIPT檢測失敗，無法取得結果。

2.血漿游離胎兒DNA比例過低

孕婦血漿中胎兒游離DNA含量比例(Fetal fraction)偏低是造成NIPT得到偽陰性結果的因素之一。有勁部落格文章《再探孕婦血漿胎兒游離DNA含量比例的影響因子》中曾經探討可能造成孕婦血漿含胎兒游離DNA比例偏低的原因。為了避免偽陰性的發生，多數檢測實驗室都會設定胎兒游離DNA含量比的最低要求，比例過低，NIPT檢測的結果就無效。

3.定序資料未通過品質管控要求

為確保結果的正確性，NIPT各檢測平台都會對最終的定序資料設定品質管控條件(QC criteria)⼀例如定序品質或定序量。資料一旦未能符合品管要求，NIPT便無法得到檢出結果。另外，NIPT各檢測平台也可能會依據該平台的檢測極限去設定特定的排除條件，例如：遇到訊息不足的DNA型態(uninformative DNA pattern)、或遇多套染色體套數異常(multiple aneuploidies)的情形就將結果排除。值得一提的是，曾有研究發現5有些孕前曾罹患過、或孕後被確認罹患癌症的孕婦，其NIPT定序資料會出現多個染色體套數異常(multiple aneuploidies)的結果，顯示血液中的母體循環腫瘤DNA ( Circulating tumor DNA )有可能會干擾NIPT的分析，因此將結果排除。

　　醫護人員對孕婦進行NIPT檢測前說明時，除了告知NIPT準確度與檢測極限之外，「檢測仍有可能無法提供結果」的情況也是應告知孕婦的重要資訊。倘若醫師或諮詢師在孕婦諮詢時便已察覺有「結果可能無法被檢出」的影響因素⼀例如孕婦體重過重，就有可能發生血漿中胎兒游離DNA含量比過低的情形⼀此時應優先建議其他屬於「診斷性質」的檢測方式。美國醫學遺傳學暨基因體學學會(ACMG;  American College of Medical Genetics and Genomics)所發行的指引也有提到⁶，NIPT無法得到檢測結果若起因為胎兒游離DNA含量比例過低，則即便重新抽血檢測，其結果仍很可能繼續受到低胎兒游離DNA含量比的影響；因此ACMG並不建議重新抽血檢測，以免延誤醫師診斷和醫療處置。

　　雖然NIPT無法提供檢測結果的狀況並不常見，但孕婦在接受檢測前仍應事先瞭解發生這種情形的可能性與原因。一旦真的出現無檢出結果的狀況，建議與醫師或諮詢師慎重討論是否需要重新抽血檢測，或者應改採其他具診斷性質的檢測方法。

參考文獻

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4. Gil, M.M., Accurti, V., Santacruz, B., Plana, M.N., Nicolaides, K.H. Analysis of cell-free DNA in maternal blood in screening for aneuploidies: updated meta-analysis. Ultrasound Obstet Gynecol. 2017 Jul;50(3):302-314. https://doi.org/10.1002/uog.17484

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