即時聚合酶鏈鎖反應(Real-time polymerase chain reaction,簡稱為Real-time PCR),又稱定量即時聚合酶鏈鎖反應(Quantitative real time polymerase chain reaction,簡稱為Q-PCR)。Q-PCR是藉由PCR擴增原理將DNA放大的同時並達到即時定量之結果,若使用傳統PCR方法來定量的話是較費時費工又容易汙染,因此Q-PCR已經廣泛使用在定量這方面。

 

目前Q-PCR常用化學物質大致上可以分為:非專一性化學物質(SYBR Green )專一性化學物質(TaqMan probe)。分述如下:

1.SYBR Green I

SYBR Green I是與雙股DNA的minor groove結合釋放出螢光,因此在PCR過程中可在每一cycle的extension步驟結束時測量螢光的強弱,就可知每PCR cycle中產生了多少PCR product。但要特別注意的一點,SYBR Green I會跟所有的雙股DNA結合,所以無法分辨特異性產物與非特異性產物,在這方面來說也是SYBR Green I的缺點。

圖片1 

 

2. TaqMan probe (hydrolysis probe)

 

TaqMan probe是一條人工合成oligonucleotid,在oligonucleotid的兩端分別標記上不同的螢光物質,5’端螢光稱為reporter而3’端螢光稱quencher。假如probe在游離狀態時,reporter及quencher的交互作用會互相遮蔽對方的螢光以達到不會發光,當DNA複製時probe被hydrolysis後,reporter與quencher會分開來,而quencher就失去可以遮蔽reporter的效果,則使reporter發光被偵測到。同樣的,probe是特異性的與Tag的片段結合,因此不會偵測到非特異的產為,在這部分來說是TaqMan probe的優點。

圖片2 

 


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